Stanovení obsahu N a P v rostlinných pletivech

Pro stanovení použijete mineralizát nadzemních částí rostlin z kultivačního experimentu.

Spektrofotometrické stanovení celkového obsahu dusíku v mineralizátu rostlinných pletiv Nesslerovým činidlem

Chemikálie:

10% H₂SO₄
Nesslerovo činidlo
roztok síranu amonného (47,5 mg·l^-1) pro kalibraci

Postup stanovení celkového obsahu N v rostlinném mineralizátu: 

1. Do 25ml odměrných baněk napipetujte 0,2 ml mineralizátu rostlinného pletiva (vzorku).
2. Přidejte asi 22 ml destilované vody a přesně 1 ml Nesslerova činidla.
3. Doplňte zkumavku destilovanou vodou po značku 25 ml a důkladně promíchejte.
4. Nechte vzorek reagovat (vybarvovat) po dobu 20 minut při laboratorní teplotě.
5. Změřte absorbanci vzorku při vlnové délce 420 nm, jako blank použijte roztok připravený stejným způsobem, ovšem bez rostlinného mineralizátu a s přídavkem 0,2 ml 10% H₂SO₄ (množství kyseliny ekvivalentní množství obsaženému ve 0,2 ml mineralizátu, při změně množství použitého mineralizátu je nutno rovněž modifikovat) .
6. Pokud jsou hodnoty absorbance změřené na vzorcích rostlinného pletiva nižší než 0,05 nebo vyšší než 1 , je nutné upravit použité množství mineralizátu (bod 1).

Kalibrační přímka:

1. Do sady jedenácti 25ml odměrných baněk napipetujte postupně tato množství standardního roztoku:
   0 – 0,1 – 0,25 – 0,5 – 1 – 1,5 – 2 – 3 – 4 – 5 – 6 ml.
2. Další postup je stejný jako v případě stanovení obsahu N v rostlinném mineralizátu, body 2 až 5. Kyselinu sírovou je zde nutné přidávat vždy!

Vyjádření výsledků a úkoly:

1. Vyjádřete graficky kalibrační přímku (XY graf) tak, že na ose x (nezávislá proměnná) bude vynesen hmotnostní obsah N ve 25 ml reakční směsi (µg) a na ose y A₄₂₀.
2. Spočtěte regresní rovnici této kalibrační přímky (při výpočtu zadejte parametr, že přímka nemusí procházet počátkem) a tuto rovnici upravte pro výpočet hmotnosti N z naměřené absorbance.
3. Přepočtěte zjištěná množství N na hmotnostní obsah N v sušině rostlinného pletiva (pro mineralizaci bylo použito navážky 0,5 g sušiny, obsah mineralizátu činil 50 ml; dále je nutné vzít v úvahu vámi napipetované množství mineralizátu pro analýzu). Výsledek vyjádřete jako hmotnostní procento obsahu N v sušině (%_m).
4. Výsledky všech vámi provedených stanovení vyjádřete tabelárně. Slovně porovnejte obsahy N ve vámi analyzovaných rostlinných pletivech.

Spektrofotometrické stanovení obsahu fosforu v rostlinných pletivech - molybdenanová metoda

Chemikálie:

• 5M H₂SO₄
• 2,5% molybdenan amonný
• eikonogen
• roztok KH₂PO₄ pro kalibraci (1,3613 g·l^-1)

Postup stanovení P v mineralizátu rostlinných pletiv:

1. Do kalibrovaných 10ml zkumavek napipetujte 0,2 ml příslušného mineralizátu.
2. Přidejte postupně přibližně 5 ml destilované vody a přesně 0,5 ml 5M H₂SO₄, 0,8 ml molybdenanu amonného a 0,4 ml eikonogenu.
3. Doplňte zkumavku destilovanou vodou po značku 10 ml a důkladně promíchejte.
4. Nechte vzorek reagovat (vybarvovat) po dobu 20 minut při laboratorní teplotě.
5. Změřte absorbanci vzorku při λ=660 nm, jako blank použijte roztok připravený stejným způsobem, ovšem bez rostlinného mineralizátu.
6. Pokud naměřená A660 leží mimo rozpětí 0,05 až 1, je nutné upravit množství mineralizátu (bod 1).

Kalibrace:

1. Roztok KH₂PO₄ pro kalibraci před použitím 10× zřeďte.
2. Do sady devíti kalibrovaných 10ml zkumavek napipetujte tato množství zředěného roztoku KH₂PO₄ pro kalibraci:
   0 – 0,3 – 0,6 – 0,9 – 1,2 – 1,5 – 1,8 – 2,1 – 2,4 ml.
3. Další postup je totožný s body 2 až 5 při stanovení P v mineralizátu rostlinných pletiv.

Vyjádření výsledků a úkoly:

1. Vyneste kalibrační graf (XY typ, osa x – látkové množství P (µmol), osa y – A₆₆₀).
2. Spočtěte regresní rovnici (při výpočtu zadejte parametr, že přímka nemusí procházet počátkem) a tuto rovnici upravte pro výpočet látkového množství z naměřené absorbance.
3. Přepočtěte zjištěná látková množství P na hmotnostní obsah P v sušině rostlinného pletiva (pro mineralizaci bylo použito navážky 0,5 g sušiny, obsah mineralizátu činil 50 ml; dále je nutné vzít v úvahu vámi napipetované množství mineralizátu pro analýzu). Výsledek vyjádřete jako hmotnostní procento obsahu P v sušině (%_m).
4. Výsledky všech vámi provedených stanovení vyjádřete tabelárně. Slovně porovnejte obsahy P ve vámi analyzovaných rostlinných pletivech.